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5小時搞定AAV空殼/實心分離!「OptiMATE梯度大師」放大攻略來了!

點擊次數:95 更新時間:2025-11-24
5小時搞定AAV空殼/實心分離!「OptiMATE梯度大師」放大攻略來了!




AAV基因療法火不火,關鍵就看「實心衣殼」純不純。CsCl密度梯度超離(DGUC)仍是金標準,但16-20 h的離心時間讓人頭大。貝克曼庫爾特生命科學推出OptiMATE「預制梯度」方案,把4×39 mL(Type 70Ti)跑樣時間壓到5小時。


方法大揭秘!5小時內搞定高純度AAV腺相關病毒純化




今天我們把同樣的速度搬進了更大容量轉子

Type 50.2Ti(468 mL)

和Type 45Ti(564 mL)

放大不翻車!









實驗如何操作?









01

實驗一:預制梯度vs自形成梯度


  • OptiMATE自動分液灌裝線性CsCl梯度(1.15-1.55 g/mL)→離心4 h;

  • 手工灌均一液(1.35 g/mL)→20 h自形成梯度。


02

實驗二:AAV樣本加載


  • 39 mL管:2×1013 vg AAV9;

  • 94 mL管:4×101? vg AAV9。


03

離心參數:


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04

實驗結果對比:



實驗一:

梯度曲線幾乎重疊,預形成4 h=自形成20 h分辨率。

Type 50.2轉子中39 mL Quick-Seal管(上圖)與Type 45Ti轉子中94 mL Quick-Seal管(下圖)的密度梯度曲線對比。

  • 圖中紅色曲線為OptiMATE梯度制備儀分配的預成型CsCl密度梯度離心4小時結果,

  • 黑色曲線為手工分配的均質CsCl密度梯度自成型離心20小時結果。

  • 誤差條為標準差。

  • 藍色與紅色條帶分別表示空衣殼與完整衣殼的預期位置范圍


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圖1



實驗二:

AAV純化條帶實拍:AAV空殼/實心條帶銳利,5 h即可手動側抽回收(圖2)

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圖2:分別展示自成型密度梯度離心20小時與預成型密度梯度離心5小時后的結果,左為39 mL管,右為94 mL管


自成型密度梯度管與預成型密度梯度管之間的條帶輪廓存在差異,特別是在部分填充與完整衣殼條帶的銳度(即清晰度)以及這些條帶與空衣殼條帶之間的分離度方面。然而,空衣殼條帶與完整衣殼條帶之間的分離程度仍足以通過視覺觀察并通過注射器穿刺提取。



實驗三:

分析型超離驗證實心AAV純度≈90%,時間節省75%

使用分析型超速離心AUC進行確認,從預成型梯度中回收的完整衣殼純度為90%,盡管超速離心時間顯著縮短至5小時。通過進一步優化預成型密度梯度,有望實現空衣殼、部分填充衣殼與完整衣殼之間更清晰的視覺分離。










結論









通過「預形成梯度+大容量轉子」把AAV空殼純化從2天壓到半天,放大不掉分辨率,OptiMATE梯度大師為基因治療CMC提速!

  • Type 45Ti:一次8×94 mL=752 mL,比傳統70Ti多出80%通量;

  • Type 50.2Ti:12×39 mL=468 mL,管數多50%,抽提步驟更少;

  • 全程封閉灌梯度→減少人為誤差,GMP場景友好


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