雙擎驅動 各有神通 | CytoFLEX mosaic傳統/光譜雙模式實戰對比
CytoFLEX mosaic光譜流式分析儀自上市以來最亮眼的設計之一就是：同時兼容傳統流式與光譜流式兩套檢測系統。可在幾分鐘內輕松切換檢測模式，真正實現“一機兩用”，全面覆蓋基礎科研與臨床科研多場景檢測需求。
以下分享的研究就是基于CytoFLEX LX流式細胞儀及CytoFLEX mosaic 88光譜檢測模塊，對DURAClone IM T細胞Panel1在傳統模式與光譜模式下的檢測效果進行了系統對比。結果表明，兩種方法均能穩定識別T細胞亞群，而光譜流式細胞術在靈敏度方面表現更優，特別適用于弱表達標志物及低豐度細胞群體的檢測。
方法介紹
采集EDTA抗凝外周血，經Ficoll-Hypaque密度梯度離心分離PBMCs，并于含FBS和DMSO的凍存液中液氮保存2。復蘇后細胞經活力染料染色，并使用10色DURAClone IM T細胞Panel進行標記。分別在CytoFLEX LX和CytoFLEX mosaic系統上采集數據，各模式分析不少于40萬個淋巴細胞。數據經CytExpert（傳統模式）和CytExpert for Spectral（光譜模式）軟件處理與分析。
圖1：(A) 使用傳統流式細胞術（CytoFLEX LX流式細胞儀）進行T細胞分析的連續設門策略點圖。每個步驟都標明了陽性群體的百分比，包括單細胞、活力細胞、淋巴細胞、CD3+CD45+、CD4+、CD8+以及通過CD45RA vs. CCR7定義的T細胞亞群。還顯示了對CD27/CD28和PD-1/CD57表達的進一步分析。(B) 使用CytoFLEX mosaic 88光譜檢測模塊配合CytoFLEX LX流式細胞儀生成的等效點圖，應用相同的設門策略并顯示相應的群體百分比。T細胞亞群包括：i. 初始T細胞 (N) ii. 中央記憶T細胞 (CM) iii. 效應記憶T細胞 (EM)
表1：光譜流式vs.傳統流式細胞術在T細胞亞群分析中的性能比較
圖2：選定標志物（CD3 APC-A750、PD-1–PC5.5和CD45-KrO）在傳統（CytoFLEX LX流式細胞儀）和光譜（CytoFLEX mosaic光譜檢測模塊）模式下的信噪比比較。顯示了每個標志物的信噪比，突出了光譜模式下靈敏度和分辨率的提高——最明顯的是CD3 APC-A750 (240.59 vs. 116.95) 和CD45-KrO (134.46 vs. 22.83)
結論
傳統和光譜流式細胞術模式在識別主要細胞群體方面表現出相當高的一致性，細胞設門結果幾乎相同。傳統流式細胞術對于常規免疫表型分析仍然有效，但光譜流式細胞術為更復雜的分析提供了顯著優勢，例如，光譜流式細胞術為某些標志物（如CD3–APC-A750和CD45–KrO）提供了更優的信噪比，其解析重疊光譜和檢測稀有或弱表達群體的能力，使其成為傳統方法的有價值補充。
CytoFLEX平臺的模塊化設計實現了傳統模式和光譜模式的無縫集成，提供了靈活性以適應廣泛的實驗需求。
參考文獻：
1.B53328, DURAClone IM T-cell Subsets Tube, 25 Tests, RUO
2.De Biasi, S., Lo Tartaro, D., Neroni, A. et al. Immunosenescence and vaccine efficacy revealed by immunometabolic analysis of SARS-CoV-2-specific cells in multiple sclerosis patients. Nat Commun 15, 2752 (2024)
